Базофильные структуры

Принципы и методы окраски гистологических препаратов. Базофилия, оксифилия

Базофильные структуры

В основе окрашивания клеток и тканей лежат физико-химические процессы (диффузия, адсорбция, абсорбция, растворимость и др.), происходящие как в красителе, так и в микроструктурах. Большое значение имеют плотность ткани и дисперсность красителя, которые определяют последовательность и скорость окрашивания.

Целью окрашивания является более отчетливое выявление различных компонентов клеток и тканей. Некоторые красители обеспечивают этот эффект, растворяясь в выявляемых компонентах, например нейтральных жирах.

Другие красители вызывают химическую реакцию, например выявление железа с образованием берлинской лазури в кислой среде.

Во многих случаях процесс окрашивания возможен только при наличии протравы, например гематоксилин окрашивает ткань в присутствии солей металлов.

Все красители, используемые в гистологической технике, подразделяются на 3 типа:

Тип красителя Пример Окрашиваемые структуры
Кислые красители Кислоты и кислые соли : -эозин -кислый фуксин. а) Окрашиваемые структуры называются оксифильными (имеющими сродство к кислым красителям). б) Это белковые компоненты цитоплазмы и неклеточные структуры (коллагеновые волокна).
Основные красители Основные соли : -гематоксилин -азур 2, кармин. а) Красящиеся структуры – базофильные (сродство к основным красителям). б) Это структуры, богатые нуклеиновыми или иными кислотами · ядра, · рибосомы, · аморфный компонент межклеточного вещества.
Нейтральные красители Смесь двух красителей: основного (азур 2) и кислого (эозин). а) Структуры, воспринимающие кислые красители, окрасятся эозином; пример – специфические гранулы в эозинофильных лейкоцитах. б) Ядра всех клеток окрашиваются азуром 2.

2. Рыхлая волокнистая с/ткань:много клеток, мало межклеточного вещества (волокон и аморфного вещества). Локализация: образует строму многих органов, адвентициальная оболочка сосудов, располагается под эпителиями – образует собственную пластинку слизистых оболочек, подслизистую основу, располагается между мышечными клетками и волокнами.

Клетки: фибробласты (5 разновидностей: юные, зрелые, фиброциты, миофибробласты, фиброкласты; образуются из малодифференцированных клеток мезенхимы; отростчатые клетки с небольшим количеством цитоплазмы; функции – образование коллагеновых и эластических волокон, аморфного вещества соединительной ткани, образование ферментов, разрушающих волокна и аморфное вещество – коллагеназы, эластазы, гиалуронидазы, синтез биологически-активных веществ ),макрофаги (образуются из моноцитов крови), тучные клетки, и др.

3. Печень: источники развития, особенности кровообращения. Классическая печеночная долька. Портальная долька. Ацинус.

СТРОМА капсула, межсегментарная и междольковая соединительная ткань

капсула образована плотной волокнистой соединительной тканью покрыта серозной оболочкой

межсегментарная и междольковая соединительная ткань представлена рыхлой соединительной тканью

ПАРЕНХИМА образована печеночными дольками

долька печени представляет собой шестигранную призму, основу которой образуют гепатоциты, расположенные тяжами

Кроме гепатоцитов в состав дольки входят:

· звездчатые клетки (клетки Ито, липоциты), имеющие множество отростков и содержащие в цитоплазме липидные включения с витамином А; эти клетки имеют мезенхимальное происхождение и являются аналогами фибробластов; они могут активироваться и превращаться в миофибробласты; они участвуют в процессах роста и пролиферации гепатоцитов, развитии цирроза, регулируют кровоток в синусоидных капиллярах и ток желчи в желчных капиллярах

· триады печени проходят вокруг дольки, состоят из ветвей печеночной артерии, воротной вены и желчного протока

· внутридольковые желчные капилляры начинаются слепо в центральных отделах дольки и идут к периферии дольки, где впадают в вокругдольковый желчный проток, желчь по ним течет от центра к периферии дольки; внутридольковый желчный капилляр не имеет собственной стенки, а образован мембранами соседних гепатоцитов, или другими словами, представляет собой узкую щель между гепатоцитами

· внутридольковые синусоидные капилляры, которые образуются за счет слияния вокругдольковых артерии и вены (ветви печеночной артерии и воротной вены), и которые идут между гепатоцитами от периферии к центру дольки и впадают в центральную вену, кровь по этим синусоидам течет от периферии к центру дольки; между капилляром и гепатоцитами имеется перисинусоидное пространство (пространство Диссе)

· центральная вена располагается в центре дольки, принимает кровь из внутридольковых синусоидных капилляров

Все дольки соединены между собой междольковой, межсегментарной соединительной тканью

Строение стенки внутридолькового синусоидного капилляра

· фенестрированный эндотелий, к которому прикреплено большое количество макрофагов(клетки Купфера),

· базальная мембрана отсутствует, имеется небольшое количество ретикулярных волокон

· образуется за счет слияния вокругдольковых артерии и вены

· идет от периферии к центру дольки, где впадает в центральную вену

· перисинусоидное пространство (Диссе) представляет собой щель между стенкой синусоидного капилляра и гепатоцитами, здесь также находятся звездчатые клетки (клетки Ито)

ИСТОЧНИКИ РАЗВИТИЯ

мезенхима – капсула и прослойки соединительной ткани, звезчатые клетки

энтодерма – гепатоциты, эпителий желчных протоков;

костный мозг – клетки Купфера

1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 16 | 17 | 18 |

19

| 20 | 21 | 22 | 23 | 24 | 25 | 26 | 27 | 28 | 29 | 30 | 31 | 32 | 33 | 34 | 35 | 36 | 37 | 38 | 39 | 40 | 41 | 42 | 43 | 44 | 45 | 46 | 47 | 48 | 49 | 50 | 51 | 52 | 53 | 54 | 55 | 56 | 57 | 58 | 59 | 60 | 61 | 62 | 63 | 64 | 65 | 66 | 67 | 68 | 69 | 70 | 71 | 72 |

Источник: https://studall.org/all3-2763.html

Гематоксилин – гистологический краситель в микроскопический технике

Базофильные структуры

Широкое применение гематоксилина в микроскопической технике обусловлено его замечательными свойствами как красителя растительного происхождения. Уникальность происхождения и отличительные природные свойства позволяют говорить о незаменимости свойств этого продукта в научных исследованиях и лабораторной диагностике.

Гематоксилин – краситель растительного происхождения, который содержится в  форме гликозида в соке кампешевого дерева (Haematoxylon campechianum), произрастающего в Индии и Америке. Родиной же этого дерева является Южная Мексика, область Кампече.

  Кампешевый экстракт, содержащий гематоксилин, изначально применялся для окраски тканей в текстильной промышленности. В качестве гистологического красителя гематоксилин стал применяться с середины XIX века. Гематоксилин, введенный в микротехнику Вальдейером в 1882 году, положил начало разработке ценнейших методов окраски.

Первый рецепт квасцового гематоксилина был предложен Бемером в 1865 году. И в XX веке стал главным красителем, применяемым для окраски ядер клеток.

Химические свойства гематоксилина

Гематоксилин представляет собой бесцветные или слабо окрашенные кристаллы сладкого вкуса, приобретающие под действием света, а также на воздухе красновато-желтую окраску. Гематоксилин малорастворим в холодной воде, но растворим в воде горячей (особенно в присутствии буры), этиловом спирте, глицерине, плохо растворим в диэтиловом эфире.

Со щелочами дает растворы пурпурного цвета, который быстро переходит в синевато-фиолетовый, а затем в коричневый. Разбавленные кислоты на гематоксилин не действуют. Обладает свойствами кислотно-основного индикатора. Брутто-формула гематоксилина  С16Н14О6 CAS 517-28-2, а наиболее часто встречающиеся синонимы: Haematoxylin, Hematoxylin, Natural Black 1, C.I.

75290, гидроксибразилин, оксибразилин.

Применение

Сам по себе гематоксилин не представляет пигмента, но при окислении гематоксилина чрезвычайно легко образует пигмент гематеин, который в свою очередь дает различные продукты более глубокого окисления, неприменимые для окрашивания.

Все рецепты приготовления гематоксилина для окрашивания препаратов имеют своей целью превращение гематоксилина в гематеин. Но ни гематоксилин, ни гематеин не способны давать окрашивание без протрав, с которыми они образуют солеобразные соединения – лаки.

В качестве протрав используют соли алюминия, железа, меди, хрома, молибдена, ванадия. Самыми распространенными протравами являются соединения алюминия (в виде алюмоаммонийных или алюмокалиевых квасцов) или железа (хлорид железа или железоаммонийный квасцы).

Другие протравы используются гораздо реже и включают хромовые квасцы и фосфорновольфрамовую кислоту.

                                   Гематоксилин                                                                                              Гематеин
 

Существуют многочисленные способы приготовления красящих растворов из гематоксилина, хотя суть всех этих методов заключается в одном – его окислении.

Методы с железным гематоксилином

Существуют два метода окрашивания железным гематоксилином – регрессивный и прогрессивный.

Первый основан на избыточном окрашивании и последующей дифференцировке путем отмывания в соответствующей жидкости; при этом соли железа вводят в раствор красителя либо обрабатывают ими срезы перед окрашиванием.

Жидкость, служащая для дифференцировки, после окончания процедуры должна быть тщательно отмыта. Если она не отмыта, то продолжает действовать после достижения желательной степени дифференцировки и может испортить окраску.

В прогрессивном методе используют кислые растворы или избыток солей железа, что позволяет избежать переокрашивания.

К методам окрашивания с железным гематоксилином обычно относят:

·       Железный гематоксилин Брусси.

·       Железный гематоксилин Вейгерта.

·       Железный гематоксилин по Ясвоину.

·       Железный гематоксилин по Рего.

·       Железный триоксигематеин по Ганзену.

·       Окраска хлористожелезным гематоксилином по Геквисту.

Методы с квасцовыми гематоксилинами

Комплексы гематоксилина с солями алюминия обычно готовят, используя двойной сульфат аммония и алюминия или алюмо-аммониевые квасцы. Такие комплексы обычно называются квасцовым гематоксилином. Иногда вместо аммониевых используются калиевые или натриевые квасцы, причем результаты окрашивания не изменяются.

Так как красящим началом является гематеин, а соли алюминия в отличие от солей трехвалентного железа не являются окислителями, растворы квасцового гематоксилина перед использованием необходимо окислить или дать им “вызреть”.

Гематеин медленно образуется при пропускании пузырьков воздуха через растворы гематоксилина (для получения однородных результатов может понадобиться 3-4 недели), при выдерживании растворов в открытых сосудах в течение нескольких недель; гематеин образуется также в твердом красителе, хранящемся в открытом сосуде во влажной атмосфере.

Большинство химических окислителей, таких, как перекиси, иодаты, перманганаты, перхлораты, окись ртути и соли трехвалентного железа, окисляют гематоксилин сразу, хотя некоторые из них действуют при нагревании.

Избирательность окраски ядер квасцовым гематоксилином возрастает в присутствии избытка солей алюминия или еще в кислых растворах.

К методам окрашивания с квасцовыми гематоксилинами обычно относят:

·          Кислый гемалаун Майера.

·          Двойная окраска гемалаун-эозином.

·          Квасцовый гематоксилин но Эрлиху.

·          Окраска гематоксилином Делафильда.

·          Окраска квасцовым гематоксилином по Ганзену.

·          Квасцовый гематоксилин по Карацци.

Также широкое распространение получили следующие методы:

·          Методика окраски срезов с дифференцировкой

·          Методика окраски гематоксилин-эозином на предметном стекле.

·          Методика проведения окраски парафиновых срезов гематоксилин-эозином по методу Бемера.

·          Методика окраски гематоксилин-эозином

Более подробно о вышеперечисленных методах можно прочитать тут.

Неоднократно предпринимались попытки отыскать более дешевую и удобную замену гематоксилину для применения в микроскопической технике.

Предлагали использовать такие природные красители, как сок черники, черной смородины, синтетические красители (антоциан ВВ, феноцианин ТС, галлеин, бразилин, ализариновый синий S, целестиновый синий).

Однако ни один из данных заменителей в настоящее время не смог полностью заменить гематоксилин. Во многом поэтому, на сегодняшний день, гематоксилин незаменим в научных исследованиях и лабораторной диагностике.

По материалам статьи Горбуновой Т.К.

«Электронный математический и медико-биологический журнал» . – Т. 7. – Вып. 1. – 2008.

www.lenreactiv.ru

Источник: https://chemjournal.livejournal.com/803.html

Гематоксилин — эозин

Базофильные структуры

ОКРАСКА ГЕМАТОКСИЛИНОМ — ЭОЗИНОМ

Окраска гематоксилин-эозином — наиболее распространённый метод окрашивания срезов. Этот методпозволяет установить отношения между частями органа, отлично выявляя все клеточные элементы и некоторые неклеточные структуры.

Практически во всех случаях независимо от поставленной задачи применяется окраска гематоксилин-эозином. В большинстве случаев для изучения структуры нормального или измененного в результате болезни органа ограничиваются этим методом окраски.

В других случаях, когда перед исследователем стоит специальная задача, пользуются особыми методами, окрашивая в то же время параллельно ряд срезов гематоксилин-эозином.

Эта окраска является двойной: гематоксилин — основной краситель — окрашивает ядра клеток, эозин — кислый краситель — красит протоплазму клеток и в меньшей степени — различные неклеточные структуры.

Гематоксилин представляет собой экстракт древесины кампешевого дерева, произрастающего в Америке. Эозин — искусственная краска. Растворы красителей должны быть приготовлены заранее. Гематоксилин сам по себе не является красящим веществом.

Для того чтобы приготовить краску, гематоксилин подвергают окислению, в результате чего он превращается в красящее вещество — гематеин.

В соединении с некоторыми солями гематеин дает четкое окрашивание ядер (используют гематоксилин Эрлиха, Майера, железный гематоксилин Гейденгайна).

Эозин — протоплазматический краситель; используется он в виде спиртовых или, гораздо чаще, водных растворов. Для приготовления эозина 0,1 г краски растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Подготовка срезов к окраске заключается в их кратковременной обработке спиртом.

Поскольку при заливке в парафин или целлоидин материал обезвоживается в спиртах, срезы, полученные при этих способах заливки, в особой подготовке для окраски гематоксилин-эозином не нуждаются. Обрабатывать необходимо замороженные срезы. При этом происходит их обезжиривание и другие изменения в структуре, что значительно улучшает окрашивание гематоксилин-эозином.

Срезы обрабатывают в 96° спирте не более 3-5 минут. Из спирта срезы переносят обратно в дистиллированную воду. Окраску производят сначала гематоксилином.

Порядок проведения окраски:

Дистиллированная водаополоснуть
Раствор гематоксилина1-20 мин
Солянокислый спиртдифференцировка
Аммиачная водасрезы синеют (контроль под микроскопом)
Проточная вода5-10 мин
Дистиллированная водаополоснуть
Раствор эозина10с-3 мин
Спирт 96%, карбол-ксилол, заключение

Результат: ядра синие, цитоплазма и межклеточное вещество розовые.

Примеры практических микропрепаратов, окрашенных гематоксилином-эозином:

Рис. 1, 2. Болезнь Фара (феррокальциноз). В веществе головного мозга из зоны подкорковых ядер зональное обызвествление (практически без признаков склероза) стенок небольших сосудов (капилляров, мелких артерий и артериол) различной степени выраженности (от пылевидного включения солей кальция в толще стенки до полного замещения сосудистых стенок кальцинатами). Вдоль стенок большинства капилляров густо расположены небольшие округло-овальные кальцинаты по типу псаммом, вокруг отдельных капилляров образованы целые муфты петрификатов.Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х100 и х250.
Рис. 3, 4. Болезнь Фара (феррокальциноз, другое наблюдение). Крупные группы густо расположенных мелких сосудов с наличием циркулярного пылевидного и в виде мелких гранул кальциноза стенок, расположенного между адвентицией сосудов и средней их оболочкой, в толще средней оболочки, полностью замещающего сосудистую стенку. Видны фрагменты сосудистых стенок в косопоперечном, продольном срезе, утолщенные кальцифицированные стенки выглядят как «кусочки вермишели».Окраска: гематоксилин-эозин. Увеличение х250.
Рис. 5. Очаговый интрамуральный кардиосклероз. Сохранившиеся кардиомиоциты в состоянии выраженной белковой зернистой дистрофии, выраженной гипертрофии.Окраска: гематоксилин-эозин.Увеличение х250.Рис. 6. Умеренная-выраженная гипертрофия кардиомиоцитов, белковая зернистая их дистрофия. В цитоплазме ряда кардиомиоцитов вокруг ядер расположены мелкие скопления золотисто-жёлтого «пигмента старения» липофусцина. Очаговая круглоклеточная инфильтрация стромы. Окраска: гематоксилин-эозин. Увеличение х250.
Рис. 7, 8. Грибковый перикардит (острый гнойно-фибринозный), группа гиалогифомикозов. Очаги выраженной лейкоцитарной инфильтрации с включениями относительно рыхлого фибрина на фоне очагово-диффузных диапедезно-деструктивных кровоизлияний расположены в эпикарде и субэпикардиальной жировой ткани. Здесь же расположены колонии грибковой микрофлоры, относящейся к гиалогифомикозам: хорошо окрашены гематоксилином-эозином, гифы в диаметре около 2-3 мкм, разрастаются пучками от центрального фокуса в виде «кустарника». Некоторые гифы дихотомично делятся. Мицелий септированный.Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250.
Рис. 9, 10. Метастазы плоскоклеточного рака в миокард, субэпикардиальную жировую ткань. Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250.
Рис. 11. Актиномикоз лёгкого с перифокальной картиной очаговой острой гнойной пневмонии.Окраска: гематоксилин и эозин.Увеличение х100.Рис. 12. Лёгочная миграция личинки аскариды. В просвете альвеолы червеобразная структура розового цвета, свёрнутая в клубок, с признаками её движения (тонкие перифокальные полоски просветления в реактивном гнойном экссудате).Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250.
Рис. 13-15. Грибковая (кандидозная) пневмония. Лёгочная ткань разрушена за счёт выраженного разрастания древовидного мицелия с перифокальной острой гнойно-фибринозной пневмонией. В отдельных полях зрения видны спорангии со спорами.Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250.Препараты предоставлены кафедрой судебной медицины Ижевской ГМА, Свердловским ОБСМЭ.
Рис. 16, 17. Грибковая (кандидозная) пневмония. Лёгочная ткань разрушена за счёт выраженного разрастания мицелия с большим количеством спороносцев.Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х100 и х250.
Рис. 18. Криптококкоз лёгкого.Окраска: гематоксилин и эозин.Увеличение х100.Рис. 19. Криптококкоз печени.Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250.
Рис. 20, 21. Печень. Очаговое острое гнойное межуточное воспаление с преобладанием эозинофилов. Очаговое выраженное полнокровие синусоидных капилляров и центральных вен с эритростазами, диапедезными микрогеморрагиями. Гепатоциты в состоянии выраженной белковой зернистой дистрофии, мелко — и крупнокапельной жировой дистрофии. Часть печёночных клеток в состоянии некробиоза-некроза.Окраска: гематоксилин-эозин. Увеличение х250.
Рис. 22. Выраженная очаговая гидропическая дистрофия гепатоцитов, сочетающаяся с мелко — и крупнокапельной жировой дистрофией печёночных клеток. Окраска: гематоксилин-эозин.Увеличение х250.Рис. 23. Гигантоклеточный гепатит. Неравномерное полнокровие синусоидных капилляров. Белковая зернистая дистрофия, признаки неравномерно выраженной их регенерации в виде деления ядер и самих клеток. Диффузно в срезах в большом количестве расположены гигантские многоядерные макрофаги.Окраска: гематоксилин-эозин.Увеличение х250.Препараты предоставлены кафедрой судебной медицины Ижевской ГМА
Рис. 24, 25. Выраженный очагово-диффузный гемосидероз ткани печени. Большое количество клеток Купфера с цитоплазмой, нагруженной большим количеством буро-коричневого пигмента. Окраска: гематоксилин-эозин. Увеличение х250.
Рис. 26-29. Почка с резко выраженной белковой зернистой дистрофией, гидропической (вплоть до баллонной) дистрофией эпителия канальцев, с некробиозом-некрозом отдельных эпителиоцитов и групп клеток различной величины, атрофией ряда канальцев различной степени выраженности. Наличие в просветах части канальцев свежих ярко-красных эритроцитов (гематурия) и выщелоченных эритроцитов, гиалиновых цилиндров, слущенных эпителиоцитов.Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250.
Рис. 30, 31. Выраженный очагово-диффузный гемосидероз селезёнки.Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250.
Рис. 32, 33. Светлоклеточный рак почки.Окраска: гематоксилин и эозин. Увеличение х250.Препарат представлен экспертом Ким С.В..

Источник: https://practicagystologa.ru/2016/04/30/gematoksilin-eozin/

Техника приготовления гистологических препаратов. Обсуждение на LiveInternet – Российский Сервис Онлайн-Дневников

Базофильные структуры

Основные этапы приготовления гистологических препаратов:

1. взятие материала;

2. фиксация;

3. промывка в воде;

4. обезвоживание и уплотнение;

5. заливка;

6. приготовление срезов;

7.окрашивание;

8. заключение срезов.

Краткая характеристика этапов:

1. Взятие материала.

Для гистологического исследования берут кусочки органов и тканей величиной не более 1 см³. Материал желательно получать как можно раньше после смерти людей (метод исследования материала трупа человека — аутопсия).

С диагностической целью материал для гистологического исследования может забираться у людей прижизненно с помощью специальных инструментов или во время операций. Этот способ получения материала носит название биопсии.

2.Фиксация.

Взятый для гистологического исследования материал сразу же должен подвергаться фиксации. Фиксация – метод обработки ткани с целью закрепления ее прижизненной структуры.

Это достигается путем воздействия на ткань специальных растворов (фиксаторов). Наиболее существенным изменением, происходящим в тканях под воздействием фиксатора является процесс свертывания (коагуляции) белков.

Количество фиксатора следует брать в 20-100 раз больше объема кусочка фиксируемого материала.

Существуют фиксаторы простые и сложные. К простым относятся 10-20% раствор формалина, 96 º спирт, 100 (абсолютный) спирт, 1-2% раствор осмиевой кислоты и др. Сложные фиксаторы: спирт – формол (спирт 70º — 100 мл. и формалин 2-5 мл.

) жидкость Ценкера (сулема – 5 г, сернокислый натрий — 1 г., двухромовокиолый калий – 2,5 г, дистиллированная вода – 100 мл., ледяная уксусная кислота 5 мл.) и др.

Продолжительность фиксации – от нескольких часов до 1 суток и более в зависимости от свойств фиксатора и характера исследуемого материала.

3.Помывка в воде.

После фиксации материал промывают (чаще всего  в течение нескольких часов в проточной воде) с тем, чтобы избавить его от избытка фиксатора и различных осадков фиксирующих жидкостей.

Изучить с помощью микроскопа такие фиксированные кусочки органов невозможно, т.к. они не прозрачны. Чтобы кусочек органа можно было микроскопировать, его надо разрезать на очень тонкие пластинки – срезы, толщина которых измеряется в микрометрах. Такие срезы получают с помощью специальных приборов – микротомов.

Но для того, чтобы резать на микротоме кусочек ткани, ее надо предварительно уплотнить. Это достигается путем  пропитывания застывающими жидкостями – расплавленным парафином.

Парафин в воде не растворяется, и поэтому промытый после фиксации кусочек ткани необходимо предварительно обезводить,  и только затем пропитывать.

4. Обезвоживание.

Обезвоживание ткани производятся постепенно (чтобы не произошло сморщивания) путем проведения ее через спирты возрастающей крепости: 50º, 60º, 70º, 80º, 90º, 96º, 100º.  В каждом спирте кусочки находятся от нескольких часов до 1 суток в зависимости от величины кусочка.

5.Уплотнение (заливка).

При заливке кусочки предварительно пропитываются теми жидкостями, которые служат растворителями для парафина (ксилол или толуол). Заливка в парафин. При заливке в парафин кусочки из абсолютного спирта

переносятся в смесь абсолютного спирта с хлороформом или ксилолом, взятых поровну, затем чистый ксилол и, наконец, в расплавленный насыщенный раствор парафина в хлороформе, где они находятся в термостате при температуре 37º  до 1 суток и более. Дальнейшая  заливка проводится в термостате при температуре 54º -56º в трех порциях парафина.

Окончательная заливка проводится в парафин с добавлением воска, который наливают в специальные бумажные коробочки или стеклянные чашки, а затем эти коробочки или чашки после появления на поверхности парафина пленки, погружают в воду.

Происходит полное затвердение парафина. Кусочки с окружающим их парафином извлекают из коробочек и с помощью расплавленного парафина, наклеивают на деревянные кубики, получаются парафиновые блоки.

Уплотнения также можно добиться  замораживанием кусочка органа (срочная биопсия).

6. Приготовление срезов.

Срезы с блоков изготовляются на микротоме. Наиболее распространены микротомы санный и замораживающий. В специальных устройствах микротома зажимается парафиновый блок и микротомный нож.

Существует механизм, поднимающий объектодержатель с блоком на заданное количество микрометров.

Это позволяет при каждом скольжении ножа в плоскости параллельной поверхности блока получать срезы толщиной 5-10 микрометров с парафиновых блоков.

7. Окрашивание.

Изготовленные на микротоме срезы окрашиваются. Перед окраской из парафиновых срезов обязательно удаляют парафин (растворением в ксилоле).

Окрашивание необходимо производить для  того, чтобы отчетливо выявить под микроскопом тонкие структуры объекта. В неокрашенных срезах большинство структур одинаково преломляет свет, поэтому рассмотреть их не удается.

Выявление на срезе гистологических структур основано на неодинаковом их отношении к красителям. Одни структуры среза вступают в реакцию с кислыми  красителями и ими окрашиваются (ацидофильные, оксифильные структуры),  другие реагируют с основными красителями и окрашиваются преимущественно  ими (базофильные структуры). Некоторые структуры окрашиваются и кислыми и основными красителями.

По происхождению различают краски естественные, к которым относятся краски растительного и животного происхождения, и краски искусственные.

Краской растительного происхождения является гематоксилин, который добывается из кампешевого  дерева, растущего в Америке и  в Армении.

К краскам животного происхождения относится кармин, который добывается из насекомых кошенили, живущих на кактусовых деревьях в Мексике, Армении и др. В  настоящее время большинство красок готовят синтетически(искусственные  краски).

По окрашиванию определенных гистологических структур различают краски ядерные (окрашивание ядра), цитоплазматические  (окрашивающие цитоплазму), и специальные, окрашивающие избирательно определенные структуры.

Ядерные краски – гематоксилин, кармин, сафранин, метиленовая синь, азур, тионин. Цитоплазматические краски – эозин, пикрофуксин.

Существуют специальные краски и реактивы: судан Ш (окрашивает жир в  оранжевый цвет), осмиевая кислота (импрегнируемый ею жир окрашиватся в черный цвет), резорцинфуксин Вейгерта (дает темно-синюю окраску эластических волокон), орсеин (окрашивает эластические волокна в бурый цвет). Метиленовый синий окрашивает нервные элементы в синий цвет, а при импрегнации серебром они приобретают коричневый цвет.

Чаще всего для окрашивания гистологических срезов применяется окрашивание  раствором гематоксилина (приготовленным по методу Бемера) и 1-2%  эозином.

8. Заключение среза.

Окрашенные и промытые в воде срезы во избежание помутнения обезвоживают в спиртах (70º, 96º),  просветляют в карбол-ксилоле, ксилоле, а затем  на предметное стекло, где находится срез, помещают каплю бальзама  и срез накрывают покровным стеклом. Бальзам представляет собой  растворенную в ксилоле смолу одного из видов сосны, растущей в Канаде (канадский бальзам),  смолу пихты (сибирский бальзам) или специальную синтетическую среду.

При исследовании биопсий с целью уточнения диагноза в гистологических лабораториях прибегают к ускоренной обработке материала. Кусочки тканей и органов при этом проходят те же этапы обработки, но за 5-7 дней.

Иногда производится так называемая срочная биопсия, когда в течение 15-80 мин. материал фиксирует, получают срезы, окрашивают их и заключают. Быструю фиксацию производят в 10% формалине, подогреваемом пламенем горелки или с использованием СВЧ-печи.

Уплотнения добиваются замораживанием (хлорэтилом, углекислотой или с помощью замораживающего микротома).

Источник: https://www.liveinternet.ru/users/tufelka/post424314108

Основная функция базофилов в крови

Базофильные структуры

В статье рассмотрим основные функции базофилов, которые относятся к типу лейкоцитов, способствующих поддержанию деятельности иммунитета. Их роль заключается в определении и уничтожении онкологических заболеваний на ранних этапах. Белые тельца также помогают затянуться порезам и ранам, препятствуют появлению аллергических реакций.

Опишем функции базофилов, эозинофилов и нейтрофилов.

Базофилы: что это такое?

Человеческое тело производит различные виды лейкоцитов. Их работа заключается в поддержании здоровья, а также защите от грибковых инфекций, паразитов, бактерий и вирусов.

Базофилы представляют собой один из типов таких белых телец (от общего количества составляют примерно 0,5 %).

Они образуются в костном мозге, однако иногда могут быть обнаружены в небольшой концентрации во всех тканях организма.

Функции и особенности метаболизма базофилов рассмотрим подробнее.

Аллергическая реакция

При низком уровне этих клеток можно говорить о значительной аллергической реакции. Повышенные базофилы в составе крови, напротив, могут быть итогом развития конкретных типов рака.

Особенность метаболизма базофилов в периферической крови в том, что они, выйдя из костного мозга, несколько часов циркулируют, затем мигрируют в ткани, в которых функционируют и живут на протяжении 8–12 суток.

Основная функция – предупреждение проникновения инфекций и вредоносных бактерий в организм человека. Эти клетки помогают затягиваться порезам, ранам, формируя через лимфоциты защитную корочку. В процессе заживления разрушаются белые тельца, возникают раздражение, зуд, ткани около раны могут отечь. Но это еще не все. Кроме основной функции, у базофилов имеются и дополнительные:

  1. В них содержится гепарин – вещество, разжижающее кровь и предотвращающее ее свертываемость.
  2. Выводят яды и токсины.
  3. Мешают возникновению анафилактического шока и аллергических реакций. Если система иммунитета подвергается чрезмерному влиянию антигенов, то происходит выделение белыми клетками гистамина. Еще они способствуют выработке специальных антител (агентов), которые называются иммуноглобулином. Благодаря этому смягчается кожный зуд.
  4. Убивают паразитов, к примеру, клещей.

Как видно, функции базофилов уникальны.

Эозинофилы, нейтрофилы, лимфоциты и моноциты

базофилов от всех лейкоцитов всего 0,5 %. Кроме такого вида телец, можно обнаружить в крови следующие типы:

  1. Нейтрофилы. Самая многочисленная группа лейкоцитов, которые борются с тяжелыми инфекционными состояниями.
  2. Лимфоциты. Они являются частью системы иммунитета, мешая вторжению вирусов и бактерий (патогенов).
  3. Эозинофилы. Они помогают бороться с инфекциями паразитарного типа. Функции базофилов и эозинофилов играют важную роль в организме.
  4. Моноциты осуществляют борьбу с инфекциями в кровотоке, антигенами, способствуют восстановлению поврежденных тканей, а также уничтожают раковые клетки.

Рассмотрим подробнее функции базофилов в иммунологии.

Тканевые базофилы (мастоциты, лаброциты, тучные клетки) встречаются в подкожно-жировой клетчатке и во всех слоях дермы.

Существует мнение о том, что тканевые молодые базофилы образуются в сосочковом слое (предшественники их выселяются здесь из микроскопической части сосудистого русла), а потом, по мере созревания, они перемещаются в подкожную клетчатку и слои дермы, лежащие ниже, при этом увеличиваясь в размерах.

Для тканевых базофилов источником развития становится кровяная стволовая клетка, более поздний потомок которой один и для них, и для базофильных лейкоцитов в составе крови.

Концентрация тучных клеток в коже у различных видов млекопитающих отличается и обратно пропорционально количеству базофильных гранулоцитов в крови. Тканевые базофилы чаще всего расположены периваскулярно.

Появилась в последнее время информация о том, что такие клетки способны попадать в интактный эпидермис.

Их масштабное проникновение в эпидермис наблюдается при кожных мастоцитомах. Тучные клетки обладают явным полиморфизмом, который проявляется степенью заполненности гранулами цитоплазмы, различной формой клеток (от округлой до угловатой и вытянутой), их величиной.

Клетки имеют маленькое овальное или округлое в некоторых случаях гиперхромное ядро. Их отличительной особенностью является присутствие цитоплазматических гранул, чей размер составляет от 0,3 до 1 мкм.

Фанулы при окраске определенными красителями способны проявлять метахромазию.

Цитоплазма тканевых базофилов включает в себя органеллы: два вида эндоплазматической сети, митохондрии, комплекс Гольджи, микрофиламенты, рибосомы, а в некоторых случаях центриоли.

Располагаются они около ядра, степень их развития определяется клеточной зрелостью. В молодых клетках они максимально развиты, в зрелых почти не видны благодаря концентрации большого числа гранул.

Каковы же основные функции тканевых базофилов?

Тучные клетки

Определяется функциональная роль тучных клеток биологически активными веществами, которые содержатся в гранулах. Они регулируют микрососудистый тонус и проницаемость, количество воды в коже, поддерживают коллоидное состояние главного компонента соединительной ткани.

Тучные клетки играют значительную роль в поддержании нормального метаболического уровня в коже. Одновременно с фибробластами тучные клетки принимают участие в биосинтезе межклеточного вещества, в том числе гликозаминогликанов.

Ими выделяются несколько медиаторов, воздействующих на деление клеток эпителия и соединительную ткань, а также регулирующих их деятельность.

Тканевые базофилы благодаря биологически активным веществам зачастую вовлекаются в кожные патологические процессы.

В них при этом отмечается отек тканей и массированная дегрануляция, то есть выход гранул, чье содержимое может стать причиной расширения микрососудов, и выход из них кровяных клеток, в первую очередь незернистых и зернистых лейкоцитов.

Медиаторы регулируют иммунные и воспалительные реакции. Болезнь, которая связана с бластомным поражением тканевых базофилов, называется мастоцитозом. Для нее характерны кожные морфологические изменения.

Функции базофилы в крови теперь известны. Каковы же нормы?

Нормы

уровня базофилов определяется посредством клинического анализа крови. Концентрация таких телец устанавливается в процентах от всего количества лимфоцитов в форме величин абсолютной и относительной.

Абсолютное количество вне зависимости от возраста – от 0,01 до 0,065*109 г/л, относительное – напрямую зависит от возраста человека и имеет следующие показатели: 0,75 % – новорожденные; 0,5 % – малыш от одного месяца; 0,6 % – годовалые дети; 0,7 % – двухлетние; 0,5-1 % – взрослая категория.

Причины повышения содержания базофилов

При продолжении воспалительной реакции больше трех дней в костном мозге происходит усиленное производство новых базофилов выше нормы. Повышение количества данных клеток в составе крови (свыше 0,2*109/л) носит название базофилоцитоза, или базофилии. Причиной такого процесса может быть завершающая стадия острого воспаления или присутствие различных патологий.

Заболевания и состояния, при которых могут повыситься базофилы, следующие:

  • аллергические реакции на лекарственные средства, продукты и другие вещества;
  • патологии крови (острый лейкоз, миелолейкоз, гранулематоз и т. д.);
  • хронические болезни желудка и кишечника;
  • патологии щитовидной железы;
  • синусит хронического типа;
  • вирусные инфекции;
  • сахарный диабет;
  • гемолитическая анемия;
  • болезнь Ходжкина;
  • употребление антитиреоидных средств и эстрогенов;
  • перед менструацией и овуляционный период.

Причиной базофилии зачастую становится недостаток железа в организме человека. Также базофилы могут быть повышены у людей, которые перенесли операцию по удалению селезенки.

Базофилоцитоз в любом случае показывает происходящие изменения в организме, приводящие к серьезным последствиям либо незначительным.

Именно поэтому при обнаружении базофилии необходимо обязательно пройти комплексное обследование, чтобы не пропустить тревожный сигнал и своевременно начать лечение, если выявится какая-либо болезнь.

Для снижения количества базофилов следует ликвидировать причину их повышения. Специалист обследует пациента и по результатам анализов определяет терапию. Но базофилы могут повышаться и у здоровых людей. Это чаще всего происходит из-за недостатка железа. Для пополнения его запасов в организме следует есть красное мясо, морепродукты, печень, овощи, жирную рыбу и фрукты.

Для лучшего усвоения железа организмом желательно во время приема пищи пить апельсиновый сок. В некоторых случаях специалисты назначают препараты, содержащие железо. Иногда для уменьшения базофилов хватает отмены приема антитиреоидных средств и эстрогенов. Привести в норму их содержание поможет витамин В12 (чаще всего в форме уколов).

Натуральные его источники – дрожжи, яйца, молоко, мясо и т. д.

Причины снижения базофилов

Если базофилы снижены, это носит название базопении. Такое состояние трудно оценить из-за слишком низкого их содержания. Базопения, может быть, у беременных женщин, и это чаще всего является нормой.

Сниженная концентрация иногда наблюдается при острых инфекциях и гипертиреозе, а также в результате употребления кортикостероидов. Базофилы могут полностью отсутствовать в крови при лечении онкологии серьезными лекарственными средствами и химиотерапии. Базопения у взрослых при постановке диагноза не учитывается.

У детей более выражено снижение, оно говорит о нарушении деятельности костного мозга либо об эндокринной болезни.

Базофилы являются незаметными и при этом важными участниками кроветворного процесса. Они сигнализируют первыми об аллергии, направляя действия других кровяных телец. Если человек знает свой уровень базофилов, можно сделать выводы о состоянии своей иммунной системы. В статье были рассмотрены основные функции базофилов.

Источник: https://FB.ru/article/424995/osnovnaya-funktsiya-bazofilov-v-krovi

ОтделКардиологии
Добавить комментарий